Les fumonisines B sont des mycotoxines potentiellement cancérigènes pour l’homme selon l’Agence Internationale de Recherche sur le Cancer. Elles sont produites par Fusarium verticilloides, et leur présence a été signalée dans les céréales notamment le maïs. Eu égard au caractère cancérigène des fumonisines B, il est indispensable de connaître le niveau de contamination des denrées céréalières par ces mycotoxines, pour la sécurité sanitaire des consommateurs. Ce travail avait pour but de valider une méthode de dosage de la fumonisine B1 (FB1) dans le mil (Pennisetum spp) et le sorgho (Sorghum bicolor). L’extraction de la Fumonisine B1 du mil et sorgho a été faite à l’aide d’un mélange acétonitrile/méthanol/eau (25/25/50, v/v/v) et la purification a eu lieu sur des colonnes immunoaffinité (Fumoniprep). La quantification de la Fumonisine B1 a été effectuée par chromatographie en phase liquide de haute performance (CLHP) avec un détecteur de fluorescence. Les longueurs d’onde d’excitation et d’émission ont été respectivement 335 nm et 440 nm. Le coefficient de variation de la reproductibilité a valu 2,1% et celui de la répétabilité a été de 2,3%. La limite de quantification a été de 0,4 µg/kg, le rendement moyen d’extraction a été de 97% pour le sorgho et de 96% pour le mil. La présente méthode mérite une attention particulière dans la mesure où sa limite de quantification est largement inférieure la teneur maximale tolérable de fumonisine dans les céréales (4000 µg/kg).